Tamoxifen诱导Cre-ERT2小鼠 使用指南


Cre-ERT2小鼠是一类含有雌激素受体(estrogen receptor,ER)的配体结合区突变体(ERT)与Cre重组酶的融合蛋白表达的小鼠。Cre-ERT2在无Tamoxifen诱导的情况下,在细胞质内处于无活性状态;当Tamoxifen诱导后,Tamoxifen的代谢产物4-OHT(雌激素类似物)与ERT结合,可使Cre-ERT2进核发挥Cre重组酶活性。


Tamoxifen给药建议如下:

1. 他莫昔芬的配置和储存
他莫昔芬不溶于水,一般建议用玉米油溶解:可按照20mg/ml的终浓度进行配置,37℃摇晃过夜。由于玉米油太多会导致他莫昔芬溶解度变差,所以建议一次配置50mL以内的他莫昔芬溶液,配置完成后分装成1mL每管,-20℃避光保存,使用时避免反复冻融,正常半年内都是可以使用的。此外,他莫昔芬对光敏感,在制备和储存过程中需要注意避光处理。

 

他莫昔芬和玉米油的品牌较多,我们常用的如下,仅作参考:

Tamoxifen
(Sigma‐Aldrich):CAS # 10540-29-1


玉米油 (Sigma‐Aldrich) CAS# 8001-30-7

 

2. 他莫昔芬的给药剂量及频次

对于成年小鼠(4周龄以上),他莫昔芬的推荐剂量为75mg/kg-120mg/kg。120mg/kg是我们现在使用比较普遍的一个剂量,一般注射3-5次(我们常用5次),隔天一次;75mg/kg是我们做过的最低剂量,但是给药需要持续5次。幼鼠剂量可以降到100mg/kg。孕鼠及老龄鼠(大于6月龄)的剂量也需要适当减少。

 

3. 他莫昔芬的给药方式

他莫昔芬可以通过腹腔注射、灌胃、饮食或饮水等途径给药,应用最广泛的是腹腔注射给药,腹腔注射的给药剂量精准,便于控制。

腹腔注射给药流程:正确抓取小鼠,将小鼠的鼻子朝向地面,露出腹部;定位动物的中线并将腹部分成四个象限,特别是动物的右下象限,是腹腔注射的合适位置(右下象限缺少重要的解剖结构);多次腹腔注射时,应交替注射部位。

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注:Tamoxifen会影响胎儿发育和生产,孕鼠诱导的时间尽量选择孕晚期,并同时注射孕酮来减少流产概率。


灌胃给药的给药剂量和频率与腹腔注射相同,在正式实验前,建议同学们先反复练习,熟练掌握灌胃给药的技巧。

饮食/饮水给药使用较少,主要是他莫昔芬水溶性差,小鼠的给药剂量不好量化,且需要的诱导时间较长(一般需要几周进行诱导),在诱导期间往往还伴随着小鼠体重的下降(约10-15%)。


4. 注意事项

A. 他莫昔芬注射完成后不建议立刻开展实验,一般来讲,停药后需要继续饲养7天,再安排后续实验。

B. 对照组小鼠需要同步进行不含他莫昔芬的玉米油溶液给药。

C. 未处理的小鼠需要和注射他莫昔芬的小鼠分笼饲养,小鼠舐舔到他莫昔芬悬液,梳毛等行为可能导致意外敲除。

D. 加热不会导致Tamoxifen失效,37℃过夜溶解他莫昔芬是没有问题的。

 

最后,不同的实验方案、不同的小鼠品系、不同的组织器官等对于给药剂量、给药频率和给药方式等的要求往往是不同的,因此,上述方法只是一个参考,面对具体实验时,同学们还应根据参考文献、实验经验先进行预实验,以确定最佳方案。


参考文献:Feil S, Valtcheva N, Feil R. Inducible Cre mice. Methods Mol Biol. 2009;530:343-63.  doi: 10.1007/978-1-59745-471-1_18. PMID: 19266339.


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