FAQ

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Tamoxifen诱导Cre-ERT2小鼠使用指南

一、品系介绍：

Cre-ERT2小鼠是一类含有雌激素受体（estrogen receptor，ER）的配体结合区突变体（ERT）与Cre重组酶的融合蛋白表达的小鼠。Cre-ERT2在无Tamoxifen诱导的情况下，在细胞质内处于无活性状态；当Tamoxifen诱导后，Tamoxifen的代谢产物4-OHT（雌激素类似物）与ERT结合，可使Cre-ERT2进核发挥Cre重组酶活性。

利用不同的启动子，可以在不同组织或细胞中特异性调控表达Cre。如肝特异性表达Cre-ERT2：B6.129-Alb^{tm1(CreERT2)Srcmo}或B6.Cg-Tg(Afp-CreERT)Srcmo。

二、常规Tamoxifen诱导方法：

Tamoxifen用玉米油溶解。因Tamoxifen的光敏特性，操作和保存时应保持避光。

Tamoxifen (Sigma‐Aldrich)：CAS # 10540-29-1 

玉米油 (Sigma‐Aldrich) CAS# 8001-30-7

注意：不同品系的小鼠所用的Tamoxifen诱导方法可能不同，应根据实际使用效果、实验经验和设置加以调整和更改。此处提供的是初步的常规诱导方法，仅供参考。

1、腹腔注射：（以下方法来自Jax lab）

Tamoxifen (Sigma‐Aldrich)：CAS # 10540-29-1 

Corn Oil  (Sigma‐Aldrich)

70% Ethanol (for disinfection)

1ml Syringe (BD)

3/8” beveled needle – 26 gauge (BD)

Procedure:

Dissolve tamoxifen in corn oil at a concentration of 20mg/ml by shaking overnight at 37°C. After tamoxifen is in solution, store at 4°C for the duration of injections.

Determine injection dose by weight, using approximately 75mg/kg body weight. For adult mice, a standard dose of 100ul tamoxifen/corn oil solution is effective for inducing recombination.

Administer tamoxifen via intraperitoneal injection (using an ACUC approved injection procedure) once every 24 hours for a total of 5 consecutive days. As a safeguard, sanitize injection site with 70% ethanol prior to injection.

Following the final injection, mice should be quarantined for 24 hours before returning to their normal animal room. Disposable pens and bedding should be discarded at this time. For Cre characterization work at the Jackson lab, there is a 7-day waiting period between the final injection and necropsy/histological analysis.

Throughout the course of tamoxifen injections and any post-injection wait period, mice should be closely monitored for any adverse reactions to the treatment.

References:

Madisen, L., et. al., Nat Neurosci. 2010; 13(1): 133–140

Sohal, D., et. al., Circ. Res. 2001; 89: 20‐25

2、灌胃给药：

（1）Tamoxifen was fed by garage to mice at doses of 0.13-0.16mg/g.

Corn oil was used to dissolve tamoxifen at 37°C or room temperature (shaking) overnight and get the stock tamoxifen whose concentration is 20mg/ml.

Reference:

Feil R., et. al., Proc Natl Acad Sci USA 1996; 93:10887–90.

Feil R, ., et. al., Biochem Biophys Res Commun.1997; 237:752–7.

MetzgerD., et. al.,. Proc Natl Acad Sci USA 1995; 92:6991–5.

Zhang Y, ., et. al., Nucleic Acids Res.1996; 24:543–8.

（2）100ul/10g体重（5mg/只），连续灌胃给药5天。等待至少一周后，检测。

药品：TAMO: 20mg/ml Tamoxifen in 10% 乙醇/玉米油（50度水浴助溶）

Oil：10% 乙醇/玉米油

分装，避光，－20度冻存

备注：

1. Do not house the tamoxifen-treated mice together with vehicle-treated or untreated animals in the same cage.

2. 给药期间小鼠体重减轻，停药后会恢复。

3. 观察到雄性小鼠给药后，外观睾丸增大。

4. 小鼠体内各组织诱导效率有所差异，通常上调约2.5-3倍

【小鼠大学问】基因工程小鼠的命名规则

基因工程小鼠的命名规则

有没有发现，当你在查询或看paper时，往往会蹦出几个贼长的，还夹杂着数字、上标、符号的名称，比如：129-Trp53^tm1Holl/J、FVB-Tg(PomcCre)5Brn...... 看上去很复杂的样子。这些其实是基因工程小鼠的全名。

如果把这一长串字符解构一下，常见的基因工程小鼠可以分为两种命名方式：

基因定点修饰的小鼠命名，比如：敲除、敲入、点突变等等。
随机转基因的小鼠命名

基因定点修饰小鼠的命名

这一类小鼠的名称基本长这样：

下面我们对这些组成部分逐一说明~

品系背景

如果是在单一的小鼠背景上完成的基因修饰，并且在繁育过程中未引入其它品系，那么就可以以品系全称来表示。比如：

如果是在混合品系背景上，那么可以用这几个品系（<3个）缩写，并以分号作为间隔。分号前表示受体，分号后表示供体。比如：在一个来自C57BL/6与129杂交 ES 细胞系上定点敲除某个基因，就可以用B6;129表示。直至这个品系与 C57BL/6 小鼠回交至近交系程度，那么可以改写为B6.129。

如果供体品系是混合背景或有未知来源，那么回交至受体品系的近交系程度后，可以用.Cg来表示，比如：B6.Cg。

如果存在3个以上祖系或有未知来源的混合遗传背景，那么以STOCK来表示。

被修饰的基因

这里的基因名用的是 Gene Symbol。Gene Symbol 和 Gene Name 到底有什么区别呢？

Gene Symbol 有以下特点：

Gene Name 则一般有以下特点：

简短，可以是几个单词，包含基因功能或特点
首字母小写（人名或专有名词除外）
使用美式拼写方法

举个例子你就明白啦，例如：

Shh 是 Gene Symbol，而 sonic hedgehog 则是它的 Gene Name。

所以，如果你想查找某个基因的敲除品系，那么最好输入 Gene Symbol，而不是 Gene Name 或者曾用名。

这里特别提一下定点过表达的这类情况：

目前最常用的两个定点过表达的整合位点，一个 Rosa26位点，一个是 H11位点。

Rosa26是一个基因，所以可以用它的 Gene Symbol，也就是 Gt(ROSA)26Sor。
H11并不是某一个特定基因，而是存在于两个基因之间的一个特定染色体位置，所以没有 Gene Symbol。目前公认的命名是 Igs2，表示 intergenic site 2 的缩写。

修饰方式^（上标）

tm：对于 ES 细胞打靶途径获得品系，用 tm 表示 targeted mutation。

em ：对于 CRISPR/Cas9 或 TALEN 等核酸酶系统介导的基因修饰品系，用 em 表示 endonuclease-mediated mutation。

编号^（上标）

这里的编号是指在该实验室中，对该基因修饰的序列号。

例如：Trp53^tm1Holl表示在Holl实验室对Trp53基因进行的第一次突变。

有时候会看到 tm1.1、tm1.2的情况，这是指条件性基因敲除（CKO）小鼠在与生殖系重组酶工具鼠交配后获得的子代小鼠品系，为了与亲代 CKO 小鼠（编号为 tm1）区分。而亲代 CKO 小鼠与其它组织特异性重组酶工具鼠交配的子代就不单独命名了。

插入结构^（上标）

对于基因敲除和条件性基因敲除，在命名中一般不加入插入结构的部分，即编号后紧跟实验室代号。

例如：Trp53^tm1Holl。

如果有敲入的基因，可以在括号内写出插入的外源基因。

例如：Cd19^{tm1(cre)Labcode}表示在 Cd19基因中敲入 Cre基因。

如果敲入的是 RNAi，那么把RNAi针对的靶点写进括号中。

例如： Gene^{tm#(RNAi:Il23a)Labcode} 。

实验室代号^（上标）

一般实验室代号是机构名称的首字母缩写。

比如：

J 表示 The Jackson Laboratory；

Kyo 代表 Kyoto University ；

Smoc 代表上海南方模式生物；等等。

随机转基因小鼠的命名

这一类小鼠的名称基本长这样，命名中Tg代表 Transgene。

转入基因

在括号中填入转入的基因的启动子信息以及 Gene Symbol。

编号

指该实验室制备的转基因 founder 编号或系列编号。

如果使用转座子系统来制备转基因小鼠的话，那么命名时在 Tg 后面加上 Tn，表示 transposable element。随后的括号内，一般需要包括：所使用的转座子系统缩写，以及构建的载体结构，两者用“-”链接：TgTn(transposon_class_abbreviation-vector)#Labcode。

例如：B6.Cg-TgTn(sb-lacZ,GFP)IF2Jtak/JtakRbrc，其中 sb 是 sleeping beauty的缩写。

知道了基因工程小鼠的命名规则，你可能又要问了，名字这么长总不能每次都写全名吧？确实，通常在文章中对所用的基因工程小鼠进行表述时，我们可以采用简写的方式。具体可以怎么写呢？

基因工程小鼠的一般简写方式

基因敲除

大家很熟悉了，可以分别用加、减号上标来表示 wildtype allele 与 mutant allele：

KO 纯合子 Gene^-/-
KO 杂合子 Gene^+/-
野生型对照 Gene^+/+ 或 WT (wildtype)

基因敲入

将敲入的元件写在上标里，例如：

Shh 基因 E177A 点突变杂合子：Shh^E177A/+
如果 Shh 基因敲入报告基因或Cre重组酶基因，可以写成 Shh^EGFP/+，或者也可以直接写成 Shh-EGFP、Shh-Cre。

转基因

一般直接写出表达的基因结构，例如：

Villin promoter 驱动 EGFP 报告基因的转基因小鼠就可以表示为 Vil-EGFP。

条件性基因敲除

将 flox 作为上标表示，比如：

CKO 纯合子 Gene^flox/flox 或 Gene^f/f
CKO 杂合子 Gene^flox/+ 或 Gene^f/+

如果与广泛表达 Cre 或生殖系表达 Cre 工具鼠交配后获得了全身敲除的小鼠，那么可以按 KO 小鼠的规则来简写。

如果与组织特异性 Cre 小鼠交配，那么可以组合写成：Gene^flox/flox；Cre。

如果文章中只用到一种组织特异性 Cre 工具鼠，也可以按 KO 的方式简写，即 Gene^-/- 可以表示 flox 纯合子且 Cre 阳性小鼠。

如果有多种不同的 Cre，那么就需要分别表示了。

例如：Tlr5 flox 小鼠分别与小肠上皮细胞（IEC）特异性 Cre（Vil-Cre）、 DC 细胞特异性 Cre（CD11c-Cre）交配的子代中发生基因敲除的纯合子小鼠可以分别表示为 Tlr5^flox/flox；Vil-Cre 和 Tlr5^flox/flox；CD11c-Cre。如果觉得这样写太麻烦，也可以这样表示：Tlr5^ΔIEC 和 Tlr5^ΔDC。

关于基因工程小鼠的命名原则大致先介绍到这里，使用基因工程小鼠的过程中有任何问题，欢迎与我们沟通。

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