血友病模型

血友病为一组遗传性凝血功能障碍的出血性疾病,其共同的特征是活性凝血活酶生成障碍,凝血时间延长,终身具有轻微创伤后出血倾向,重症患者没有明显外伤也可发生“自发性”出血。南模可提供F8与F9基因敲除小鼠模型。

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血友病为一组遗传性凝血功能障碍的出血性疾病,其共同的特征是活性凝血活酶生成障碍,凝血时间延长,终身具有轻微创伤后出血倾向,重症患者没有明显外伤也可发生“自发性”出血。南模可提供F8与F9基因敲除小鼠模型。

FVIII基因敲除小鼠模型

血友病A是由凝血因子VIII(FVIII)缺乏和(或)其功能障碍所引起的X连锁隐性遗传性出血病。人的FVIII基因位于X染色体上,全长186kb,由26个外显子组成。临床研究表明,血友病A主要是由于FVIII基因的点突变、基因倒置、小段基因的缺失和插入造成的。


南模生物自主研发的FVIII基因敲除小鼠是在小鼠胚胎干细胞(SCR012,来源于129S6/SVEV)上以同源重组方式造成内源FVIII基因序列部分缺失(16~19外显子),进而通过四倍体补偿技术获得完全胚胎干细胞来源的FVIII基因敲除小鼠,该小鼠进一步与C57 BL/6J小鼠交配育种,品系名称:B6.129-F8tm1Smoc,品系编号:NM-KO-00012(进入订购页面)


经实验证实FVIII基因敲除小鼠具有典型的血友病A表型:

  • 在进行小鼠剪尾和脚趾编号时,若不给予及时的止血处理,雄性杂合子小鼠和雌性纯合子小鼠会因大量失血而死亡。

  • FVIII活性检测显示(Fig5),雄性杂合子(-/y)和雌性纯合子(-/-)小鼠的FVIII的活性仅为野生型(wt)小鼠的8%和10%,而雌性杂合子小鼠的活性为野生型小鼠的80%。

  • 激活的部分凝血活酶时间(APTT)检测显示(Fig6),雌性杂合子小鼠的APTT时间比野生型小鼠的略有延长,而雄性杂合子(-/y)和雌性纯合子(-/-)小鼠的APTT值均大于120秒。


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Fig1. FVIII基因敲除小鼠构建策略示意图


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Fig2. FVIII基因敲除小鼠基因型鉴定PCR结果


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Fig3. FVIII基因敲除小鼠FVIII mRNA表达水平检测结果


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Fig4. FVIII基因敲除小鼠免疫组化染色结果


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    Fig5. FVIII基因敲除小鼠FVIII活性检测


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    Fig6. FVIII基因敲除小鼠APTT检测


    FVIII基因敲除小鼠是在整体动物水平研究血友病A发病机制和药物筛选的理想动物模型,可以为血友病A治疗药物的筛选和评价、血友病A的基因治疗等研究提供理想的动物模型和新的实验手段。为进一步阐述疾病发生机制、疾病防治药物的评价筛选和新疗法的研发提供了有效工具。


    F9基因敲除小鼠模型

    血友病B是由凝血因子IX(FIX)缺乏和(或)其功能障碍所引起的X连锁隐性遗传性出血病。人的FIX基因位于X染色体上,全长31kb,由8个外显子组成。通过CRISPR/Cas9技术介导的非同源重组修复,造成蛋白翻译移码突变并提前终止。点击此处进入F9-KO订购页面


    实验数据:

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    Fig7 F9构建策略图。


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    Fig8 F9 mRNA在WT和KO小鼠品系肝组织中的表达。


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    Fig9 WT和KO小鼠品系血浆中FIX蛋白的浓度。

    Data in c and d were acquired from 8 mice per group, and are shown as the mean ± the s.d.

    Twotailed unpaired Student’s t tests were used to determine the P value.**P < 0.01


    A型血友病(HA)小鼠凝血实验套餐详情

    实验动物

    血友病组:F8 或 F9 基因敲除小鼠

    对照组:野生型C57BL/6J

    实验方法

    1、小鼠断尾实验(Tail-clip assays)

    2、活化部分凝血酶原时间测定(APTT)

    3、纤维蛋白原测定(FIB)

    4、二聚体检测(D-Dimer)

    流程简介

    小鼠环境适应1周,按分组进行给药,给药15min后,进行凝血实验,每天实验20只小鼠。凝血实验结束后,小鼠恢复2周(此间HA小鼠可能会陆续死亡约30%),再次给药,15min后,摘眼球取全血,分离血浆,进行APTT、FIB,ELISA检测DD二聚体检测。


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