F8-KO

血友病A是由凝血因子VIII（FVIII）缺乏和(或)其功能障碍所引起的X连锁隐性遗传性出血病。人的FVIII基因位于X染色体上，全长186kb，由26个外显子组成。临床研究表明，血友病A主要是由于FVIII基因的点突变、基因倒置、小段基因的缺失和插入造成的。

FVIII基因敲除小鼠模型（简称“血友病A小鼠模型”）是在小鼠胚胎干细胞（SCR012，来源于129S6/SVEV）上以同源重组方式造成内源FVIII基因序列部分缺失（16~19外显子），进而通过四倍体补偿技术获得完全胚胎干细胞来源的FVIII基因敲除小鼠，该小鼠进一步与C57 BL/6小鼠交配育种，该小鼠模型具有明确的血友病A症状。

该小鼠模型的建立为我国血友病A治疗药物的筛选和评价，以及血友病A的基因治疗研究提供了理想的动物模型和研究手段，具有重要的应用价值。饲养时需注意同笼小鼠间争斗可能导致小鼠内出血甚至死亡，剪尾后必须采取及时的止血措施如烧灼尾部切口，防止敲除纯合子小鼠失血和死亡。

Fig1. FVIII基因敲除小鼠构建策略示意图

Fig2. FVIII基因敲除小鼠基因型鉴定PCR结果

Fig3. FVIII基因敲除小鼠FVIII mRNA表达水平检测结果

Fig4. FVIII基因敲除小鼠免疫组化染色结果

Fig5. FVIII基因敲除小鼠FVIII活性检测

Fig6. FVIII基因敲除小鼠APTT检测

经实验证实FVIII基因敲除小鼠具有典型的血友病A表型：

• 在进行小鼠剪尾和脚趾编号时，若不给予及时的止血处理，雄性杂合子小鼠和雌性纯合子小鼠会因大量失血而死亡。

• FVIII活性检测显示（Fig5），雄性杂合子（-/y）和雌性纯合子（-/-）小鼠的FVIII的活性仅为野生型（wt）小鼠的8%和10%，而雌性杂合子小鼠的活性为野生型小鼠的80%。

• 激活的部分凝血活酶时间（APTT）检测显示（Fig6），雌性杂合子小鼠的APTT时间比野生型小鼠的略有延长，而雄性杂合子（-/y）和雌性纯合子（-/-）小鼠的APTT值均大于120秒。

FVIII基因敲除小鼠是在整体动物水平研究血友病A发病机制和药物筛选的理想动物模型，可以为血友病A治疗药物的筛选和评价、血友病A的基因治疗等研究提供理想的动物模型和新的实验手段。为进一步阐述疾病发生机制、疾病防治药物的评价筛选和新疗法的研发提供了有效工具。

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