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F8-KO

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Description

血友病A是由凝血因子VIII(FVIII)缺乏和(或)其功能障碍所引起的X连锁隐性遗传性出血病。人的FVIII基因位于X染色体上,全长186kb,由26个外显子组成。临床研究表明,血友病A主要是由于FVIII基因的点突变、基因倒置、小段基因的缺失和插入造成的。

FVIII基因敲除小鼠模型(简称“血友病A小鼠模型”)是在小鼠胚胎干细胞(SCR012,来源于129S6/SVEV)上以同源重组方式造成内源FVIII基因序列部分缺失(16~19外显子),进而通过四倍体补偿技术获得完全胚胎干细胞来源的FVIII基因敲除小鼠,该小鼠进一步与C57 BL/6小鼠交配育种,该小鼠模型具有明确的血友病A症状。

该小鼠模型的建立为我国血友病A治疗药物的筛选和评价,以及血友病A的基因治疗研究提供了理想的动物模型和研究手段,具有重要的应用价值。饲养时需注意同笼小鼠间争斗可能导致小鼠内出血甚至死亡,剪尾后必须采取及时的止血措施如烧灼尾部切口,防止敲除纯合子小鼠失血和死亡。


Validation Data

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Fig1. FVIII基因敲除小鼠构建策略示意图

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Fig2. FVIII基因敲除小鼠基因型鉴定PCR结果

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Fig3. FVIII基因敲除小鼠FVIII mRNA表达水平检测结果

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Fig4. FVIII基因敲除小鼠免疫组化染色结果

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Fig5. FVIII基因敲除小鼠FVIII活性检测

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Fig6. FVIII基因敲除小鼠APTT检测

经实验证实FVIII基因敲除小鼠具有典型的血友病A表型:

  • 在进行小鼠剪尾和脚趾编号时,若不给予及时的止血处理,雄性杂合子小鼠和雌性纯合子小鼠会因大量失血而死亡。

  • FVIII活性检测显示(Fig5),雄性杂合子(-/y)和雌性纯合子(-/-)小鼠的FVIII的活性仅为野生型(wt)小鼠的8%和10%,而雌性杂合子小鼠的活性为野生型小鼠的80%。

  • 激活的部分凝血活酶时间(APTT)检测显示(Fig6),雌性杂合子小鼠的APTT时间比野生型小鼠的略有延长,而雄性杂合子(-/y)和雌性纯合子(-/-)小鼠的APTT值均大于120秒。


FVIII基因敲除小鼠是在整体动物水平研究血友病A发病机制和药物筛选的理想动物模型,可以为血友病A治疗药物的筛选和评价、血友病A的基因治疗等研究提供理想的动物模型和新的实验手段。为进一步阐述疾病发生机制、疾病防治药物的评价筛选和新疗法的研发提供了有效工具。


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