F8-KO

血友病A是由凝血因子VIII（FVIII）缺乏和(或)其功能障碍所引起的X连锁隐性遗传性出血病。FVIII基因敲除小鼠模型（简称“血友病A小鼠模型”），该小鼠模型具有明确的血友病A症状。该小鼠模型的建立为我国血友病A治疗药物的筛选和评价，以及血友病A的基因治疗研究提供了理想的动物模型和研究手段，具有重要的应用价值。饲养时需注意同笼小鼠间争斗可能导致小鼠内出血甚至死亡，剪尾后必须采取及时的止血措施如烧灼尾部切口，防止敲除纯合子小鼠失血和死亡。 通过敲除F8基因exon 16-19，建立F8-KO小鼠模型。与此相似的品系还有F8-KO(2)(NM-KO-200608),敲除区域为exon 1-26。

Fig1. FVIII基因敲除小鼠构建策略示意图

Fig2. FVIII基因敲除小鼠基因型鉴定PCR结果

Fig3. FVIII基因敲除小鼠FVIII mRNA表达水平检测结果

Fig4. FVIII基因敲除小鼠免疫组化染色结果

Fig5. FVIII基因敲除小鼠FVIII活性检测

Fig6. FVIII基因敲除小鼠APTT检测

经实验证实FVIII基因敲除小鼠具有典型的血友病A表型：

• 在进行小鼠剪尾和脚趾编号时，若不给予及时的止血处理，雄性杂合子小鼠和雌性纯合子小鼠会因大量失血而死亡。

• FVIII活性检测显示（Fig5），雄性杂合子（-/y）和雌性纯合子（-/-）小鼠的FVIII的活性仅为野生型（wt）小鼠的8%和10%，而雌性杂合子小鼠的活性为野生型小鼠的80%。

• 激活的部分凝血活酶时间（APTT）检测显示（Fig6），雌性杂合子小鼠的APTT时间比野生型小鼠的略有延长，而雄性杂合子（-/y）和雌性纯合子（-/-）小鼠的APTT值均大于120秒。

Fig7. 不同品系F8敲除小鼠活化部分凝血活酶时间（APTT）检测。结果显示F8-KO小鼠（NM-KO-00012）凝血所需时间明显长于野生型小鼠，且F8-KO（NM-KO-00012）与F8-KO(2)（NM-KO-200608）凝血时间无明显差别，表型类似。

FVIII基因敲除小鼠是在整体动物水平研究血友病A发病机制和药物筛选的理想动物模型，可以为血友病A治疗药物的筛选和评价、血友病A的基因治疗等研究提供理想的动物模型和新的实验手段。为进一步阐述疾病发生机制、疾病防治药物的评价筛选和新疗法的研发提供了有效工具。