CRISPR/Cas9 Knockout 小鼠基因型鉴定方法
对于NHEJ 随机修复获得的基因敲除小鼠,一般可通过PCR+ 测序方法进行基因型鉴定。示意图如下:
图9. A. 野生型小鼠PCR 产物测序峰图。B. 阳性F0 代小鼠基因型鉴定PCR 产物测序峰图。CRISPR/Cas9 作用后,由于发生NHEJ
随机修复,产生多种基因型,在Cas9 切点附近出现杂峰现象。C. 阳性F1 代小鼠基因型鉴定PCR 产物测序峰图。阳性F1 小鼠基因
组一个拷贝是野生型,一个拷贝是突变体,在Cas9 作用位点附近区域测序有后双峰现象(两种基因型产生了两种峰型)。C’ 和C” 为C. 图
测序PCR 产物连接T-vector 后,单克隆测序结果。其中,C’ 为野生型,C” 为突变体。峰型对比可以发现C” 较C’ 缺失了两个碱基
CC。C’ 和C” 峰型结果可以和C 图峰型结果向吻合。
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