体内CAR-T风口已至！看“人源化小鼠”如何为tLNP递送“精准导航”

In vivo CAR-T 可以通过慢病毒或者LNP两种方式进行递送，从临床数据来看，两条技术路线均展现出令人振奋的疗效信号。

虹信生物（LNP路线）开发的 HN2301 是一款基于 mRNA-LNP 的 in vivo CAR-T 候选药物，利用靶向 CD8⁺ T 细胞的 EnC-LNP 递送 CD19 CAR mRNA，用于治疗系统性红斑狼疮（SLE）。2025年9月，该研究成果发表于 New England Journal of Medicine，成为全球首个公布的基于 mRNA-LNP 技术的 in vivo CAR-T 临床数据，展现了良好的安全性和疗效信号^（2）。此外，通过环状RNA（circRNA）等新技术延长mRNA的表达时间，也是该领域的热点方向。

在慢病毒路线方面，Kelonia Therapeutics 开发的 KLN-1010（靶向BCMA）于2026年ASCO年会上公布了I期临床数据，客观缓解率（ORR）达到 100%，随后被礼来以最高70亿美元收购^（3）。同期，传奇生物在2026年EHA年会上公布了其 CD19/CD20 双靶点 in vivo CAR-T 疗法 LB2501 在复发/难治性B细胞非霍奇金淋巴瘤中的I期临床数据，同样达到 100% ORR^（4）。

tLNP 递送 in vivo CAR-T 的核心逻辑在于：通过静脉注射偶联靶向抗体的 LNP，将编码 CAR 的 mRNA 精准递送至体内特定免疫细胞，在体内直接完成"细胞工程化"过程。这一过程涉及两个关键的分子识别事件：

普通小鼠的免疫靶点与人同源性仅约60%，人源抗体无法有效识别小鼠同源蛋白。因此，评价一款 tLNP-in vivo CAR-T 药物，必须同时确保上述两个识别事件均能走通——这需要构建双靶点乃至多靶点人源化小鼠模型。

南模药物靶点人源化小鼠平台覆盖以 T 细胞标记分子人源化为基底，搭配各类致病抗原，打造"递送+杀伤"一体化评价模型：

3.1 CD8 VHH-tLNP 在 hCD8A 小鼠上的验证

实验一：

实验设计：

• 对比 CD8 VHH 偶联 tLNP 在 WT C57BL/6 小鼠与 HO hCD8A (NM-HU-242587) 小鼠体内的 eGFP-luc mRNA 递送效率。

• 10 μg 与 30 μg 两个剂量梯度

• IVIS 全身成像 + 离体器官成像

主要结果：

图1. 在HO hCD8A小鼠中，经靶向hCD8A的LNP处理后各器官的体内生物发光成像。向野生型C57BL/6小鼠和HO hCD8A小鼠（n=3，7周龄，雄性）静脉注射包裹荧光素酶mRNA的10 µg或30 µg抗hCD8a VHH偶联LNP。随后收集脑、心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏及淋巴结等器官，并使用IVIS系统评估荧光素酶表达情况。（A）不同剂量组中各器官的代表性生物发光信号（以相对辐射度表示，例如光子/秒/平方厘米/球面度）。（B）IVIS信号进行定量分析。

主要结论：CD8 VHH-tLNP 可在 hCD8A 人源化小鼠体内实现 T 细胞靶向递送，脾脏信号呈现明确的剂量依赖关系，是评价 CD8 靶向 in vivo CAR 的理想模型。

实验二：

实验设计：

• 基于 HO hCD8A (NM-HU-242587) 小鼠，评估 CD8 VHH 偶联 tLNP体内递送 eGFP mRNA 的效果，并与人 PBMC 及小鼠脾脏细胞的体外递送情况进行对比分析。

• 流式检测 TCRβ+CD4-T细胞上eGFP的表达

• 实验所使用eGFP mRNA及CD8VHH偶联tLNP均由南京金斯瑞生物科技有限公司合成并提供

主要结果：

图2. CD8 VHH-tLNP 在人 PBMC 及 hCD8A 小鼠体内外 TCRβ+CD4- T 细胞上的 eGFP 递送效率。将人PBMC，hCD8A 小鼠脾脏细胞在体外使用 anti-CD3（1 μg/mL）、anti-CD28（1 μg/mL）及IL-2（300 IU/mL）刺激培养 48 小时（PBMC）或24小时（hCD8A脾细胞）。随后，未处理，或加入对照 LNPs 或抗 CD8 靶向 LNPs（anti-CD8 tLNP-eGFP）共同孵育24小时后进行流式检测。将 HO hCD8A 小鼠经静脉注射（i.v.）给予模拟对照组（mock control）、对照 LNPs 或抗 CD8 靶向 LNPs（anti-CD8 tLNP-eGFP），24小时后取小鼠外周血，脾脏及骨髓进行流式检测。

主要结论：

• anti-CD8 tLNP 可以在人PBMC，hCD8A 小鼠脾脏细胞的TCRβ+CD4- T细胞中实现>80%的转染效率

• anti-CD8 tLNP 在注射后24h可以实现 hCD8A 小鼠体内各组织（脾脏、骨髓 、外周血 ）的TCRβ+CD4- T 上eEGP的高效递送和表达。

3.2 CD7 VHH-tLNP 在 hCD7(V2) 小鼠上的验证

实验一：

实验设计：

CD7 VHH 偶联 tLNP在hCD7(V2) 小鼠（NM-HU-232423）递送 Luc-mCherry mRNA，

• IVIS 成像追踪荧光素酶体内分布

• FACS 分析报告基因在各淋巴细胞亚群的表达情况

• 实验所使用Luc-mCherry mRNA及CD7 VHH偶联tLNP均由南京金斯瑞生物科技有限公司合成并提供

主要结果：

图3. 在杂合型hCD7(V2)小鼠中，靶向hCD7的LNP体内生物发光成像。向HE hCD7(V2)小鼠静脉注射10 µg或25 µg的CD7 VHH偶联LNP，该LNP包封了编码荧光素酶-mCherry mRNA（LNP由GenScript提供）。（A）注射后第1天，从背侧和腹侧进行全身成像。（B）成像结果的定量分析。（C）在全身成像后，收集脑、心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏及淋巴结等器官，图中展示了不同剂量组中各器官的代表性生物发光信号以及（D）各组中每个器官的定量辐射度(photons/sec/cm²/sr) 。

图4. 通过FACS检测HE hCD7小鼠脾脏中淋巴细胞亚群的mCherry表达。从静脉注射10 µg或25 µg LNP（由GenScript提供）的HE hCD7(V2)小鼠（雄性，18周龄）中收集脾细胞，并于注射后一天通过流式细胞术进行分析。

主要结论：

• 生物发光信号主要分布于肝脏、脾脏及淋巴结，呈现剂量依赖性

• CD7 靶向性导致细胞表面 CD7 表达下调——这是 VHH 特异性结合靶点并介导内化的直接证据

• CD7VHH tLNP的靶向递送能力和靶细胞表面CD7的表达值相关

实验二：

实验设计：

4种CD7 VHH 偶联 tLNP及Control LNP静脉注射24小时后，在hCD7(V2) 小鼠（NM-HU-232423）体内递送检测

• FACS 检测多组织来源各淋巴细胞亚群的 hCD19-CAR (FMC63) 表达阳性率

• 实验所使用 hCD19 CAR mRNA及CD7 VHH偶联tLNP均由南京金斯瑞生物科技有限公司合成并提供

主要结果：

图5. 通过FACS检测HO hCD7小鼠全血，脾脏，骨髓，肝脏淋巴细胞亚群上CAR表达。HO hCD7(V2)小鼠（雌性性，10周龄）从静脉注射4中不同CD7 VHH 偶联 tLNP （由GenScript提供）及Control LNP，并于注射后24小时通过流式细胞术分析小鼠全血，脾脏，骨髓及肝脏淋巴细胞亚群上CAR的表达阳性率。（A）小鼠全血淋巴细胞亚群上CAR的表达情况。（B）小鼠脾脏淋巴细胞亚群上CAR的表达情况。（C）小鼠骨髓淋巴细胞亚群上CAR的表达情况。（D）小鼠肝脏mCD45+, mCD45-及mCD3+细胞上CAR的表达情况。（n=2 or 3）。CD7VHH-LNP-2及CD7VHH3-LNP-2给药组给药后24小时内均有一只小鼠死亡。

主要结论：

• CD7VHH偶联的tLNP在注射后24h 可以在小鼠脾脏和骨髓的CD8 T细胞中实现高于30%的CAR转染效率且在肝脏的非免疫细胞（CD45-）中脱靶表达极低

• 小鼠全血，脾脏及骨髓上CAR的阳性表达率在表达hCD7的不同免疫细胞亚群上均有差异。

• 不同LNP配方的CD7 VHH 偶联 tLNP的递送能力不同。

• hCD7小鼠可用于评价不同配方CD7 tLNP在不同组织来源淋巴细胞上的递送能力，同时可以用于安全性评价。

From bench to bedside——In Vivo CAR 正在以“现货+体内生产”的范式改写细胞治疗的产业逻辑。而临床前药效评价的核心，始终在于"模型是否模拟人体"。

南模生物药物靶点人源化小鼠平台以其 1500+ 靶点人源化小鼠矩阵、成熟的 tLNP 验证经验和全流程 CRO 服务能力，致力于成为全球 in vivo 细胞治疗研发的临床前金标准。

上海南方模式生物科技股份有限公司（Shanghai Model Organisms Center, Inc.，简称"南模生物"），成立于2000年9月，是一家上交所科创板上市高科技生物公司（股票代码：688265），始终以编辑基因、解码生命为己任，专注于模式生物领域，打造了以基因修饰动物模型研发为核心，涵盖多物种模型构建、饲养繁育、表型分析、药物临床前评价等多个技术平台，致力于为全球高校、科研院所、制药企业等客户提供全方位、一体化的基因修饰动物模型产品解决方案。