Cell Rep Med | 张宏恺团队揭示hOX40免疫治疗的巨噬细胞应答机制，设计三联疗法重塑肿瘤微环境

OX40是T细胞激活后瞬时上调的共刺激受体，其激动型抗体可增强效应T细胞功能、清除肿瘤内调节性T细胞（Treg），是肿瘤免疫治疗的重要靶点。目前已有十余款OX40激动剂进入实体瘤临床试验，然而早期研究显示单药疗效有限，尚无药物进入后期临床试验。OX40抗体响应差异背后的肿瘤微环境机制，仍不明确。

2026年3月26日，南开大学张宏恺研究员团队在Cell Reports Medicine在线发表题为"Immunogenic tumor cell death and T-cell-derived IFN-γ elicit tumoricidal macrophages to potentiate OX40 immunotherapy"的研究论文。研究通过单细胞测序解析OX40抗体响应与非响应肿瘤的免疫微环境差异，发现一氧化氮合酶NOS2阳性巨噬细胞是响应的关键标志，并据此设计了"TLR4激动剂MPLA+干扰素γ+OX40抗体"的三联疗法，在多种肿瘤模型中取得显著疗效。

南模生物为该研究提供了hOX40（目录号：NM-HU-00041）、Fcgr2b-KO（目录号：NM-KO-00130）、Fcer1g-KO（目录号：NM-KO-190187）小鼠模型。

单细胞测序锁定NOS2+巨噬细胞：OX40响应的关键标志

研究团队以临床阶段OX40激动剂HFB301001的亚有效剂量，使用实验室制备的OX40激动剂处理MC38荷瘤小鼠，将小鼠分为响应组与非响应组，并对双侧肿瘤模型一侧切除的肿瘤进行单细胞测序。结果显示，响应组肿瘤富集CD8+ T细胞和巨噬细胞，非响应组单核细胞比例较高。进一步聚类发现，一个被命名为Mac_C1的巨噬细胞亚群在响应组特异富集，高表达Nos2及炎症相关基因，呈M1样表型。在HFB301001一期临床试验的肿瘤活检样本中，病情稳定的患者NOS2表达也高于进展患者，提示NOS2+巨噬细胞与OX40疗法响应相关。

IFN-γ与免疫原性细胞死亡：重塑巨噬细胞的双信号

是什么驱动了NOS2+巨噬细胞的分化？通路分析显示，Mac_C1显著富集IFN-γ与LPS信号通路；响应组肿瘤细胞的表面钙网蛋白暴露增多，提示免疫原性细胞死亡水平更高。体外实验表明，单独用活化的CD8+ T细胞上清或肿瘤细胞裂解液处理骨髓来源巨噬细胞，仅轻度诱导NOS2表达，而两者联用可显著上调NOS2，抑制IFN-γ信号则此协同效应消失。这说明，T细胞来源的IFN-γ与肿瘤细胞死亡释放的损伤相关分子模式（DAMPs）协同，将肿瘤相关巨噬细胞重塑为杀伤性表型。

MPLA+IFN-γ+OX40：三管齐下的组合策略

基于此机制，研究团队设计了三联疗法：用低毒性的TLR4激动剂MPLA模拟DAMPs信号，联合IFN-γ与OX40激动剂抗体。在MC38结肠癌模型中，三联疗法实现67%（4/6）的肿瘤完全消退，而OX40抗体单药仅为20%（1/5）；在B16黑色素瘤模型中，治愈率由单药的0%提升至90%（5/6）；在KPC胰腺癌模型中达40%。治愈小鼠再次接种MC38细胞时能有效排斥肿瘤，提示形成了抗肿瘤免疫记忆。清除CD8+ T细胞或巨噬细胞均显著削弱三联疗法的疗效，而在Nos2基因敲除小鼠中疗效也明显受损，证实NOS2依赖的巨噬细胞直接杀伤是不可或缺的一环。

OX40抗体的另一重作用：清除Treg，解除对巨噬细胞的抑制

OX40抗体除共刺激T细胞外，还可经Fc受体依赖机制清除高表达OX40的Treg。研究显示，Treg能显著抑制NOS2+巨噬细胞的极化；三联疗法中，OX40抗体通过清除Treg解除这种抑制，使肿瘤边缘与内部均出现NOS2+巨噬细胞。在缺失激活性Fc受体共同γ链的Fcer1g-KO小鼠中，三联疗法疗效明显减弱，而在Fcgr2b-KO小鼠中不受影响，表明OX40抗体的Treg清除作用是三联协同的重要环节。

综上所述，此研究从OX40抗体临床响应差异出发，揭示了IFN-γ与免疫原性细胞死亡信号协同诱导NOS2+肿瘤杀伤性巨噬细胞的机制，并据此设计出MPLA、IFN-γ与OX40抗体联用的组合疗法，在多种小鼠肿瘤模型中取得显著疗效，为突破OX40单药疗效限制、优化OX40靶向免疫治疗提供了新策略。