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ProxCre、CrexER与dCreER:三种Cre重组酶优化策略如何解决谱系示踪中的异位表达问题

在谱系示踪实验中,单一 Marker 的异位表达是困扰研究者的核心难题。前几期我们介绍了通过改造报告基因工具鼠来提高标记特异性的方案,本期将聚焦另一条技术路线——对重组酶本身进行改造。roxCre、CrexER、dCreER 三种遗传策略,通过让一种重组酶调控另一种重组酶的活性,配合转基因小鼠和报告系统,实现了对 A⁺B⁺ 或 A⁺B⁻ 细胞群的精准标记,为遗传修饰动物模型在细胞命运研究中的应用提供了有力工具。

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2A肽与IRES怎么选?多基因表达连接元件原理、优缺点与选型攻略

本文系统讲解两种应用最广泛的多顺反子表达元件:IRES(内部核糖体进入位点)和2A自剪切肽。内容覆盖IRES的帽子非依赖翻译起始原理及"上下游蛋白表达量不等"的局限,2A肽的核糖体跳跃机制与"等量表达"优势,4种常用2A肽(F2A、E2A、P2A、T2A)的切割效率比较,以及2A的残留氨基酸尾巴对蛋白功能的潜在影响,帮你在实验设计中做出合理选择。

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易胖!斑秃?过敏?这些都和上皮细胞有关

鉴于上皮细胞分类的复杂性和分布的广泛性,南模生物在小鼠各类上皮细胞标志基因中敲入重组酶元件,构建了多种Cre/Dre工具鼠,有助于满足大家不同的科研需求。

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谱系示踪中基因标记异位表达的解决方案:独家报告基因系统原理与案例详解

谱系示踪中,启动子在非目标细胞中的弱激活(异位表达)是导致细胞命运追踪争议的常见原因。独家报告基因系统(Exclusive Reporter)利用Cre-loxP与Dre-Rox双重组酶的错落排布,使首次重组自动阻断二次重组,从而实现A⁺B⁻细胞的精准标记,排除异位表达干扰。本文详解独家报告基因系统的结构设计、两种重组先后顺序下的标记逻辑,以及c-kit基因在心脏谱系追踪中的经典应用案例,为选择合适的报告基因工具鼠提供参考。

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养鼠必修课|你问,我答(第 2 期)

上一期文章回答了"小鼠是什么、怎么选、什么等级、到货怎么验收"。鼠已进笼、适应期也过了,这一期接着讲接手之后最要紧的五件事:怎么把每只小鼠记清楚、笼卡上该写什么、什么时候可以让它们合笼、检栓法检查的是什么、见栓就等于怀孕吗。Q1:小鼠几十只,怎么编号才不会乱?编号的目的是&quo

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谱系示踪的难点——基因标记的异位表达如何避免?(下)

通常,细胞或组织中的特异性 Marker 意味着启动子的活性在这种细胞类型中相对较高,而并非在其他细胞中完全不表达。在其他细胞中,目的启动子也可能被弱激活,这种现象也被叫做异位表达。异位表达对谱系追踪的影响很大,常常会导致一些关于细胞命运的争议。

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谱系示踪的难点——基因标记的异位表达如何避免?(上)

通常,细胞类型中基因的激活不是“有”或“无”,特定的基因标记意味着启动子的活性在这种细胞类型中相对较高,而在其他细胞中,目的启动子也可能被弱激活,这种现象也被叫做异位表达。异位表达对谱系追踪的影响很大,常常会导致一些关于细胞命运的争议。

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养鼠必修课|你问,我答(第 6 期)

这一期讲繁育不顺时的排查与补救:合笼不生先查什么,吃仔弃养怎么排查,母鼠不喂奶如何补救,脱毛打架是否需要检查

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Cre-lox介绍及使用

1987年Brian Sauer博士报道了Cre-loxP重组系统可用在细胞中操作特定位点的特异性重组,由于该系统具有操作简单、重组率高的优点,如今已成为体内外遗传操作的常用工具。现在利用Cre-lox系统,我们可以在特定细胞、组织或整个生物体,甚至在特定时间点敲除或表达某个基因,实现对特定基因的时空特异性操作,这对基因功能的研究和人类疾病动物模型的建立都有重大意义。

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Cre-lox系统介绍及使用汇总

你一定听说过Cre-lox重组系统,无论你是否直接进行过基因操作。由于Cre-lox系统具有操作简单、重组率高的优点,如今已经成为体内外遗传操作的强有力工具。利用Cre-lox系统,可以在特定细胞、组织或整个生物体,甚至在特定时间点敲除或表达某个基因,实现对特定基因的时空特异性操作,这对基因功能的研究和人类疾病动物模型的建立都具有深刻影响。

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