R26-CAG-2xKRAB-dCas9-IRES-EGFP

品系全名

C57BL/6Smoc-Gt(ROSA)26Sorem1(CAG-Loxp-2xKRAB-dCas9-IRES-EGFP)Smoc

目录号

NM-KI-18007

品系状态

精子冻存

导出PDF

基因信息

基因名
Gt(ROSA)26Sor

品系描述

将CAG-LSL-2xKRAB-dCas9-IRES-EGFP-WPRE-pA插入到小鼠Rosa26基因中,建立CRISPRi基因表达调控工具小鼠。该小鼠已去掉stop。 CRISPRi是基于一个没有核酸酶活性的dCas9蛋白,当dCas9被引导到某个基因的转录起始位点TSS(transcription start site)时,dCas9能够物理性阻碍RNA聚合酶的通过,导致基因沉默。为了进一步提高转录抑制的效率,dCas9可以融合一些基因抑制结构域,如KRAB(krüppel-associated box)结构域,强化抑制效果。
应用领域:CRISPRi,基因调控工具

验证数据

通过Westernblot验证2xKRAB-dCas9表达


Rosa26- CAG-LSL-2xKRAB-dCas9 mice were crossed with Dppa3-Cre mice to delete STOP cassette.


Anti-Cas9 (1).jpg

图1 该小鼠含有loxp-STOP-loxp结构,是条件性过表达2XKRAB-dCas9,需要和Cre交配才能表达2XKRAB-dCas9 。该小鼠和广泛表达的Cre(Dppa3-Cre)交配后检测Cas9表达,westernblot检测发现Cas9在肝脏、脾、肺、肾、胸腺、皮质和小脑中都高表达。

通过荧光测定验证EGFP表达

CRISPRi—inhibitor: dCas9-KRAB_06.png

图2 该小鼠和广泛表达的Cre(Dppa3-Cre)交配后检测EGFP表达,检测发现大脑、肺、肾、胸腺、肝脏中EGFP表达较强。


你也可能感兴趣

Tamoxifen诱导Cre-ERT2小鼠 使用指南

Cre-ERT2在无Tamoxifen诱导的情况下,在细胞质内处于无活性状态;当Tamoxifen诱导后,Tamoxifen的代谢产物4-OHT(雌激素类似物)与ERT结合,可使Cre-ERT2进核发挥Cre重组酶活性。

查看
【小鼠大学问】基因工程小鼠的命名规则

常见的基因工程小鼠可以分为两种命名方式,包括基因定点修饰的小鼠命名,比如:敲除、敲入、点突变等等,和随机转基因的小鼠命名。

查看