CRISPR/Cas9 点突变小鼠基因型鉴定方法
一般可通过PCR+ 测序方法进行基因型鉴定。示意图如下:
图10. A. 野生型小鼠PCR 产物测序峰图。B. 阳性F0 代小鼠基因型鉴定PCR 产物测序峰图。CRISPR/Cas9 作用后,由于发生同源
重组修复(HR) 的同时,也可能发生非同源重组修复(NHEJ)。因此,切点附件可能出现杂峰现象。C. 阳性F1 代小鼠基因型鉴定PCR
产物测序峰图。阳性F1 小鼠基因组一个拷贝是野生型,一个拷贝是突变体,在Cas9 作用位点附近区域测序,突变点位置有双峰现
象(野生型和突变体,两种基因型产生了两种峰型)。C’ 和C” 为C 图测序PCR 产物链接T-vector 后,单克隆测序结果。其中,C’
为野生型,C” 为突变体。峰型对比可以发现C” 较C’ 的目的突变点CCT 突变为GTT,C’ 和C” 峰型结果可以和C 图峰型结果相吻合。
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