获得转基因首建鼠后如何建系?
在获得转基因首建鼠之后,可以根据以下流程来建立转基因品系。
图1. 随机插入转基因小鼠建系过程。
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Piggybac 转座酶系统介导的转基因需注意
Piggybac 转座酶倾向于将目的片段插入到转录活跃的区域,大大提高了获得目的基因表达阳性Founder 鼠的
概率,但Piggybac 转座酶系统介导的基因插入存在多位点整合的可能。由于多位点整合的存在,在Founder
鼠后续传代繁育的过程中,伴随多整合位点的分离,会出现以下现象:1. 基因型鉴定阳性小鼠比例高于单位点
插入;2. 后代阳性小鼠目的基因表达量较Founder 鼠低(表达降低的量依赖于Founder 鼠中整合位点的数量
和整合位置),且相互之间不一致。故建议:每个Founder 鼠与野生型小鼠至少回交繁殖2–3 代以获得外源基
因单位点整合,且稳定表达的转基因小鼠。
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