获得转基因首建鼠后如何建系?


在获得转基因首建鼠之后,可以根据以下流程来建立转基因品系。

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图1. 随机插入转基因小鼠建系过程。

  • 每一个Founder鼠分别与野生型小鼠(如C57BL/6J)交配

  •  Founder 鼠之间禁止交配

  • 在无明确杂合子与纯合子的鉴定方法前,禁止杂合子之间交配

  • 每个代次阳性小鼠建议与野生型小鼠传代,不建议使用同窝野生型小鼠交配

  • 建议获得的 F1 代中每个阳性小鼠都与野生型小鼠交配至F2 代以上,鉴定表达情况后进行实验

Piggybac 转座酶系统介导的转基因需注意

Piggybac 转座酶倾向于将目的片段插入到转录活跃的区域,大大提高了获得目的基因表达阳性Founder 鼠的

概率,但Piggybac 转座酶系统介导的基因插入存在多位点整合的可能。由于多位点整合的存在,在Founder

鼠后续传代繁育的过程中,伴随多整合位点的分离,会出现以下现象:1. 基因型鉴定阳性小鼠比例高于单位点

插入;2. 后代阳性小鼠目的基因表达量较Founder 鼠低(表达降低的量依赖于Founder 鼠中整合位点的数量

和整合位置),且相互之间不一致。故建议:每个Founder 鼠与野生型小鼠至少回交繁殖2–3 代以获得外源基

因单位点整合,且稳定表达的转基因小鼠。



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