M-NSG 重度免疫缺陷小鼠

由南模生物自主研发的M-NSG 小鼠在NOD-SCID小鼠基础上利用CRISPR/Cas9技术对Il2rg基因进行敲除,获得严重免疫缺陷小鼠。该小鼠缺失成熟T、B、NK细胞,是人源化小鼠、异种移植、免疫重建的重要载体;对于研究人类造血干细胞、肿瘤发生与治疗、免疫缺陷疾病与体内免疫机制研究都具有重要意义。

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M-NSG 小鼠(NOD-PrkdcscidIl2rgem1/Smoc)

由南模生物自主研发,该品系在 NOD-SCID 的基础上敲除 Il2rg 基因,是一种严重免疫缺陷小鼠,缺失成熟T、B、NK细胞,是人源化小鼠、异种移植、免疫重建的重要载体;对于研究人类造血干细胞、肿瘤发生与治疗、免疫缺陷疾病与体内免疫机制研究都具有重要意义。


M-NSG小鼠基本信息

品系全名

NOD-PrkdcscidIl2rgem1/Smoc

目录号

NM-NSG-001

基因型

Male: Prkdc-/- , IL2rg-/Y ; Female:Prkdc-/- , IL2rg-/-

品系描述

  • NOD背景下Prkdcscid纯合突变:Prkdc(protein kinase, DNA-activated, catalytic polypeptide)基因主要编码DNA依赖性蛋白激酶(DNA-PK)的催化亚基,是参与双链DNA断裂修复、免疫球蛋白和T细胞受体可变(V)、多样性(D)、连接(J)区段重组的重要基因。Prkdcscid突变代表严重的联合免疫缺陷,表现为缺失T、B细胞,无法介导细胞和体液免疫,不排斥同种和异种移植。无功能T细胞和B细胞,NK细胞活性低,没有溶血补体活性,骨髓发育缺陷。血清免疫球蛋白(Ig)泄漏率非常低,非常适合同种和异种肿瘤移植。

  •  IL2rgnull突变:Interleukin-2受体gamma链(IL-2Rγc,又称CD132)是具有重要免疫功能的细胞因子Il2、Il-4、Il-7、Il-9、Il-15和Il-21的共同受体亚基,该基因敲除后的小鼠机体免疫功能严重降低,通过多种受体阻断细胞因子信号传导,导致功能性NK细胞缺陷。

  • M-NSG严重免疫缺陷小鼠,缺失成熟T、B、NK细胞,可高效地植入人CD34+造血干细胞(HSC)、外周血单核细胞(PBMC)、病人来源异种移植物(PDX)或成体干细胞和组织,基本上可以植入人体免疫系统,是研究人体免疫功能,传染病,糖尿病,肿瘤学和干细胞生物学的重要免疫缺陷小鼠,是目前国际公认的免疫缺陷程度较高、较适合人源细胞或组织移植的工具小鼠。

特性与应用

  • 缺乏成熟的 T、 B 和 NK 细胞

  • 对人源细胞和组织免疫排斥反应低

  • 肿瘤细胞成瘤性好,少量细胞即可成瘤

  • 人体细胞和组织移植存活率显著提高

  • 适用于人类造血干细胞移植,人源化小鼠模型制备

  • 适合用做异源细胞和组织移植的载体小鼠

  • 可用于免疫学、肿瘤学、人类疾病感染模型等研究

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M-NSG小鼠表型分析

T、B、NK细胞FACS检测

M-NSG FACS.png

图1. M-NSG小鼠脾脏中T 、B和NK细胞完全缺失。

取C57BL/6、NOD-scid和M-NSG小鼠的脾脏细胞,并通过FACS对其中T 、B和NK细胞的组成进行分析。


M-NSG FACS2.png

图2. M-NSG小鼠血液中T 、B和NK细胞完全缺失。

取C57BL/6、NOD-scid和M-NSG小鼠的外周血,并通过FACS对其中T 、B和NK细胞的组成进行分析。


M-NSG 小鼠CDX肿瘤模型

M-NSG A549.png

图3. A549肺肿瘤细胞在M-NSG小鼠上能更有效地建立肿瘤模型。

分别将3x106 A549细胞皮下接种到C57BL/6、Balb/c Nude 、NOD-scid和 M-NSG小鼠中,在不同的时间点测量肿瘤体积。


M-NSG RAJI.png

图4. Raji淋巴肿瘤细胞在M-NSG小鼠上能更有效地建立肿瘤模型。

分别将1x106 Raji细胞皮下接种到C57BL/6、Balb/c Nude 、NOD-scid和 M-NSG小鼠中,在不同的时间点测量肿瘤体积。


M-NSG小鼠已成功建立CDX模型

M-NSG CDX.png




饲养

小鼠的接收

在接收动物的时候,免疫缺陷小鼠常常会和其它免疫系统正常的品系一起被送到动物房。这时,最好不要随机地拆开运输箱,而是根据笼内动物地免疫系统状态以及健康情况依次进行接收:

首先接收免疫缺陷小鼠,其次接收免疫健全同时健康状况良好的小鼠,最后接收免疫健全且健康状况不佳的小鼠。

接收时,应该在超净工作台或层流罩中打开小鼠运输箱。直接将免疫缺陷小鼠由运输箱转移到准备妥当的饲养笼中去。

小鼠的饲养

动物房必须定期检测微生物指标,确保环境的洁净程度。

免疫缺陷小鼠要饲养在动物房洁净等级最高的区域。有条件的情况下,应将免疫缺陷小鼠与免疫健全小鼠隔离开来进行饲养,免疫缺陷小鼠有独立的饲养房间。

对于实验动物操作人员,最好有专人负责免疫缺陷小鼠品系的维持与管理。如果工作或实验人员必须同时兼顾免疫缺陷和免疫健全小鼠,那么应该遵循先处理免疫缺陷小鼠,后管理免疫健全小鼠的顺序,而且不能再回到免疫缺陷小鼠区域,以免交叉污染。

当实验需要免疫健全小鼠与免疫缺陷小鼠同时同环境饲养时(比如:同源肿瘤移植模型等),在操作时应优先处理免疫缺陷小鼠。前期在选择免疫健全小鼠时,应更加严格地筛选健康状况最好的同源正常小鼠。在比较相同遗传背景的免疫缺陷和免疫健全小鼠时,这两组小鼠应来自同一个供应商、同一个动物质量体系。

操作人员必须始终穿戴好个人防护:无菌服、手套、口罩、防护帽,覆盖所有皮肤表面,防止细菌传播给小鼠。

免疫缺陷小鼠所需要的饲养物品都要经过消毒灭菌,包括:笼具、垫料、饮水、饲料、笼内丰富物等。

  • 环境

温度:20-26℃,日温差不超过4℃

湿度:40-70%

昼夜时长:12h/12h或14h/10h

照度:小鼠照度15-20lux,工作照度200lux以上

噪音:低于60dB

建议使用隔离包或独立通风的IVC笼具。IVC环境对于免疫缺陷小鼠的饲养比较有利。

  • 饲料

可以使用高脂肪低蛋白的饲料,M-NSG小鼠的饲料需要蛋白质含量≥18%,脂肪含量≥6%,采用Co60辐照灭菌,可以保证小鼠的健康生长繁殖。

  • 饮水

如果在隔离包饲养,可采用高压灭菌的纯水作为饮用水。

如果在SPF级环境饲养,建议采用酸化水(用HCl调节PH至2.5-3.0),经高压灭菌后使用。可有效预防假单胞菌和金黄色葡萄球菌的污染。

  • 笼具与垫料

如不在隔离包饲养,需要在超净工作台更换垫料,而且需要使用消毒过的镊子转移小鼠到新的笼盒,在日常换笼过程中,要在超净工作台中进行更换,每换一笼时夹取小鼠的镊子要进行消毒,避免用手直接接触小鼠。每周都要更换笼具。


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