谱系示踪
常用的谱系示踪是将特定启动子驱动的 Cre 工具小鼠和 Rosa26-LSL-Reporter 报告基因小鼠结合使用。特异性表达的 Cre 酶会切除 loxP 位点之间的转录终止序列,从而激活报告基因的持续表达。由于该修饰在 DNA 水平上进行,可以遗传到子代细胞,因而可以永久标记特定类型的细胞。通过观察这些被标记上的荧光信号来追踪某类特定细胞及其后代所有细胞的增殖、分化以及迁移等活动,为研究细胞命运及谱系提供有力手段。如下图所示:
应用案例
Enhancing the precision of genetic lineage tracing using dual recombinases
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Cre-ERT2在无Tamoxifen诱导的情况下,在细胞质内处于无活性状态;当Tamoxifen诱导后,Tamoxifen的代谢产物4-OHT(雌激素类似物)与ERT结合,可使Cre-ERT2进核发挥Cre重组酶活性。
查看你一定听说过Cre-lox重组系统,无论你是否直接进行过基因操作。由于Cre-lox系统具有操作简单、重组率高的优点,如今已经成为体内外遗传操作的强有力工具。利用Cre-lox系统,可以在特定细胞、组织或整个生物体,甚至在特定时间点敲除或表达某个基因,实现对特定基因的时空特异性操作,这对基因功能的研究和人类疾病动物模型的建立都具有深刻影响。
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